WWW.DOCX.LIB-I.RU
БЕСПЛАТНАЯ  ИНТЕРНЕТ  БИБЛИОТЕКА - Интернет материалы
 

«Пептидный ингибитор NF-B снимает сократительную дисфункцию диафрагмы у мышей – модели миодистрофии Дюшена. Jennifer M Peterson,1* William Kline,1* Benjamin D Canan,2* ...»

Пептидный ингибитор NF-B снимает сократительную дисфункцию диафрагмы у мышей – модели миодистрофии Дюшена.

Jennifer M Peterson,1* William Kline,1* Benjamin D Canan,2* Daniel J Ricca,3 Brian Kaspar,4 Dawn A Delfn,5 Kelly DiRienzo,1 Paula R Clemens,6,7 Paul D Robbins,6 Albert S Baldwin,3 Pat Flood,3 Pravin Kaumaya,8 Michael Freitas,1 Joe N Kornegay,9 Jerry R Mendell,4 Jill A Rafael-Fortney,5 Denis C Guttridge,1 and Paul ML Janssen2

1Department of Molecular Virology, Immunology, and Medical Genetics, The Ohio State University, Columbus, Ohio, United States of America

2Department of Physiology and Cell Biology, The Ohio State University, Columbus, Ohio, United States of America

3University of North Carolina at Chapel Hill and TheraLogics Inc., Research Triangle Park, North Carolina, United States of America

4Nationwide Children’s Research Institute, Columbus, Ohio, United States of America

5Department of Molecular and Cellular Biochemistry, The Ohio State University, Columbus, Ohio, United States of America

6Department of Neurology, University of Pittsburgh, Pittsburgh, Pennsylvania, United States of America

7Neurology Service, Department of Veterans Affairs Medical Center, Pittsburgh, Pennsylvania, United States of America

8Department of Microbiology, The Ohio State University, Ohio, USA

9Department of Pathology and Laboratory Medicine, University of North Carolina, Chapel Hill, North Carolina, United States of America

Address correspondence and reprint requests to Paul ML Janssen, Department of Physiology and Cell Biology, The Ohio State University, 1645 Neil Avenue, Hamilton Hall, Columbus, OH 43210. Phone: 614-247-7838; Fax: 614-292-4888; E-mail: janssen.10@osu.edu; or Denis C Guttridge, Department of Molecular Virology, Immunology, and Medical Genetics, The Ohio State University, 910 Biomedical Research Tower, 460 W 12th Avenue, Columbus, OH 43210. Phone: 614-688-3137; Fax: 614-688-8675; E-mail: denis.guttridge@osumc.edu*JMP, WK, and BDC all contributed equally to this paper.

Received December 16, 2010; Accepted January 19, 2011.

Предисловие

Миодистрофия Дюшена летальное генетическое заболевание, характеризующиеся прогрессирующим поражением скелетной мускулатуры. Потеря способности передвигаться находится в зависимости от дегенерации скелетной мускулатуры, что представляет собой главную узнаваемую фенотипическую черту пациентов с миодистрофией Дюшена. Однако, жизнеугрожающие осложнения развиваются при прогрессировании болезни, как возможная причина смерти у большинства пациентов в результате поражения диафрагмы или сердца (1).

Варианты лечения для пациентов с МДД не ограничены фактически с ни одним в настоящее время эффективным для того, чтобы повысить качество сжимающейся дисфункции, включая ту из диафрагмы. Однако, мы недавно продемонстрировали, что торможение NF-B улучшилось, сократимость диафрагмы вторгаются mdx мыши, широко используемая модель мыши DMD

Те данные гарантировали дальнейшее исследование возможности терапевтического планирования для NF- B как средства для снижения дистрофических процессов. Хроническая активация NF- B была описана у пациентов с миодистрофией Дюшена(2) и эта происходит очень рано при развитии патологии (4). NF- B был обнаружен как фактор усугубляющий развитие болезни у mdx мышей (2,5,6). Хотя блокада NF- B должена все же быть проверена у пациентов с миодистрофией Дюшена (7), текущая стандарты лечения включают использование глюкокортикоидов, которые воздействуют частично посредством блокады NF- B (8,9). Таким образом, NF- B терапия может считаться выгодной для лечения МДД.





Классическая передача сигналов NF- B происходит в ответ на стимулы, такие как TNF, сигнал которого передается через комплекс киназы IB (IKK) (10). IKK состоит из двух каталитических субъединиц киназы, IKK и IKK, и регулирующей субъединицы под названием IKK (11). Инактивированные гетеродимеры NF- B, состаящие из p65-p50 поддерживаются в таком состоянии преимущественно в цитоплазме ингибитором IB. Фосфорилирование IB IKK вызывает последующую деградацию IB 26 протеосом, таким образом высвобождая p65-p50 проникающие в ядро, связываются с ДНК, и воздействуют на основные транскрипционные факторы и коактиваторы для транскрипции генов (12).

Комплекс IKK, содержащий NEMO, является критическим для передачи сигналов через классический NF- B (13,14). Когда ассоциация между IKK и IKK и NEMO разрушена, передача сигналов через IKK невозможна. В нашем предыдущем исследовании мы использовали в своих интересах эту ассоциацию, чтобы блокировать классический путь активации NF- B. Мы продемонстрировали, что 11 аминокислотный пептид, который связываются с C-терминальной областью в пределах IKK и IKK, предотвращает ассоциацию с NEMO, назван NBD пептид, ослаблюет хроническую активацию NF- B у mdx мышей (2). Этот пептид эффективно уменьшил проявления патологии в мышцах mdx мышей, уменьшая воспламенение и увеличивая регенерацию, и улучшил функциональные возможности диафрагмы значительно. В дополнение к NBD другие анти-NF- B фармакологические и биологические агенты (5,15–21), как показывали исследования, были эффективны в снижении уровня mdx патологии в различной степени. Однако, неизвестный является ли какой-либо из этих агентов подходящим для развития для клинических испытаний. Мы рассуждали, что такой состав должен будет показать существенное функциональное усовершенствование диафрагмы, так как это - мышца, которая наиболее проявляет дистрофические процессы у пациентов с МДД (22). Мы помним, что улучшение, необходимого у модели, чтобы увеличить силу мышц и качество жизни у пациентов с МДД трудно предсказать из-за видовых различий. Однако, чтобы двигаться к нашей цели - может ли NBD быть препаратом для лечения МДД, мы выполнили это исследование, чтобы оценить дозы и формы NBD, которые эффективны для того, чтобы улучшить диафрагму и функцию мышц конечности у mdx мыши.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Мыши

Мыши (mdx [C57BL/10 ScSn DMDmdx]) купленный в Лаборатории Джексона (Бар-Харбор, Мэн, США) были размещены и размножались в Медицинском колледже Университета штата Огайо, при обычных условиях с постоянной температурой и влажностью и получали стандартную диету. И mdx мыши женского пола и мужского пола использовались для этих исследований. Эксперименты на животных были одобрены Университетом штата Огайо Установленным Комитетом по Уходу за животными и Использованию.

Синтез пептида

Оригинальный пептид NBD (TALDW SWLQTE) (23) был произведен при использовании ABI 430A синтезатора пептида твердой фазы (Прикладные Биосистемы, Фостер-Сити, Калифорния, США) со стандартом tBOC (tert-butyloxycarbonyl) - химия (Йельский университет, Нью-Хейвен, Коннектикут, США). Пептид был очищен от среды при использовании гидрофтористой кислоты. Получающиеся сырые материалы были очищены HPLC на Vydac (Разделения Vydac, Гесперия, Калифорния, США) при использовании градиентов ацетонитрила в 0.10 % трифлюорацетиловой кислоте (TFA). После липофилизации очищенных фракций ожидаемая молекулярная масса пептида была подтверждена при использовании лазерной десорбционной масс-спектрометрии ионизации. Пептид был разведен в диметилсульфоксиде, то же самое, как показано нашей группой ранее (2).

Пептид NBD был произведен американским Peptides (Саннивейл, Калифорния, США) при использовании подобных процедур к оригинальному пептиду NBD кроме того с дополнительной очисткой, в котором использовались градиенты ацетата, а не TFA, чтобы элюировать пептид из колонки. Эту форму называют GLP-NBD.

Для преобразования NBD от ацетатной соли до TFA, пептид был растворен в минимальном количестве 1:1 ацетонитрил / вода. Для каждых 10 мг используемого пептида 18 мкл TFA были добавлены и смешаны. Раствор был заморожен при использовании сухого льда и смеси изопропилового спирта и впоследствии лиофилизирован. Пептид был повторно растворен в смеси ацетронитрила/воды и TFA, и лиофилизация повторена еще два раза. Эта процедура позволяла растворить в воде пептид NBD.

Режим лечения

Мышей Mdx в возрасте 3.5 к 4 недель лечили пептидом в дозе 40 - 200 мкг/мышь 3 еженедельно внутрибрюшинным введением в течение 4 недель. Хотя условия доставки изменилась немного, эти дозы обеспечили среднюю дозу 2 - 10 мг/кг, соответственно, в течение периода лечения. Мdx мыши, не получавшими пептид, получали только раствор дозированный подобным образом (10%-ый физ. раствор 90% диметилсульфоксида). В сходном возрасте мыши подобранного дикого типа (ВЕС) C57/BL10 были использованы как группа контроля. Поскольку GLP синтезировал пептиды (GLP-NBD и TFA-NBD), вода использовалась в качестве растворителя.

Измерения силы диафрагмы

После обезболивания мышей (уретан, 200 мг в 0.7 мл i.p.) Грудная клетка была вскрыта, и диафрагма была удалена. Секции 1.2-1.9 мм шириной (с длиной от ребра до сухожилия) диафрагмы были изолированы в присутствии BDM, чтобы минимизировать повреждение (24), и приложенный к преобразователю силы (KG7, Приборы для исследований, Гейдельберг, Германия) и винту микрометра, который учитывает регулирование длины мускула. Все эксперименты по сокращению были сделаны при 37 ° C. Хотя эта температура отклоняется от ранее установленных принципов, она лучше отражает физиологическую температуру в естественных условиях сокращения диафрагмы, и таким образом максимизирует экстраполяцию данных, полученных в естественных условиях. Кроме того, эта температура использовалась в наших собственных предыдущих исследованиях (2,25,26), и подобные / идентичные эксперименты были сделаны другими лабораториями (27–29). Мышцы были тогда растянуты к длине, когда сокращения оптимальны, они находились в покое в течение 10 минут. После того, они были подвергнуты исследованию, состоящему из ряда восьми тетанических сокращений, происходящих в интервалах 2 минут, кажде с продолжительностью 100 миллисекунд со стимулами в 20, 50, 80, 120, 150, 180, 200, и 250 гц соответственно. Измерения силы были нормализованы к площади поперечного сечения. Все оценки и анализ данных были сделаны исследователем, не имевшим отношение к лечению мышей. Следующие удаленые полосы диафрагмы были подготовлены к гистологическому и биохимическому анализу.

Функциональные Измерения

Мыши были подвергнуты режиму, который включал пять последовательных дней однообразного механического труда-бега со скоростью 25 метров/мин. на 15%-ой наклонной поверхности в течение 35 минут. Функциональные измерения были получены при проведении тестов на определение усталости при 25 оборотах в минуту в течение 180 секунд.

Оценка стабильности пептида

Определенные количества NBD или были недавно подготовлены или сохранены при различных температурах в течение различного времени, и впоследствии проанализированы масс-спектрометрией. LC-MS/MS был выполнен на Ultimate 3000 system (Dionex, Саннивейл, Калифорния, США) вместе с Орбитрэпом XL LTQ спектрометром с высокой разрешающей способностью (Thermo Finnigan, Сан-Хосе, Калифорния, США). Сорок нанограммов образца были введены в колонку с полностью измененной фазой C18 (Биоресурсы Michrom, Калифорния, США, Волшебный C18AQ, 200 мкм 150 мм, 3 мкм, 200 ) при расходе 2 мкл/мин. Образец был элюирован при использовании линейного градиента фазы A (муравьиная кислота на 0.1 %) и фазы B (муравьиная кислота на 0.1 % в ацетонитриле). Градиент увеличился с 2 % B до 35 % B за 28 минут, тогда до 50 % за 5 минут и 90 % за 4 минуты. Массовым спектрометром управляли в зависимом от данных способа MS/MS, в котором каждый полный просмотр MS сопровождается пятью просмотрами MS/MS. Данные были проанализированы вручную.

EMSA

EMSA был выполнен как описано ранее (30,31). Для EMSA ядерные экстракты были подготовлены из тканей мышц, или из C2C12 миофибрилл, которые обработали или не обрабатывали в течение 30 минут TNF. Рассматриваемые клетки были выделены за 1 час до обработки TNF или увеличивающимися концентрациями TFA-NBD

Гистология

Последовательно замороженные секции мышц (10 мкм) были взяты из проксимальных и дистальных частей передней большеберцовой мышцы(ПБМ). Для диафрагмы последовательные секции не используемых для функционального анализа были взяты в трех отдельных местах вдоль мышцы в попытке получить аналитические данные всей мышцы. Секции из каждой части мышц были маркированы для иммунофлюоресценции. Основные антитела были электронными-MyHC (1:50; Банк Гибридомы Исследований, университет Айовы, Айова Сити, Айовы, США), Коллаген IV, (1:500; Millipore, Биллерика, Массачусетс, США), и F4/80 (1:200; Serotec, Kidlington, Великобритания).

Алекса Флуор 488-и Алекса Флуор 568 вторичные антитела (1:250; Молекулярные Исследования; Invitrogen, Карлсбад, Калифорния, США), использовались для косвенной иммунофлюоресценции. Окрашивание определялось при помощи микроскопа Olympus BX51 (Olympus Soft Imaging Solutions GmbH, Сентер-Вэлли, Пенсильвания, США). Были проанализированы все три секции (одна из каждой части мышц). Был вычислен процент секции, положительной при окрашивании IgG, eMyHC или F4/80, в пропорции к общей площади секции (положительная область/общая площадь 100 %).

Статистика

Сила сокращения была проанализирована при использовании несоединенных тестов t и дисперсионного анализа (АНОВА). Максимум две мышцы от каждой мыши были включены в исследование, и они были усреднены для статистических исследований. Гистология была проанализирована при использовании теста t. P <0.05 считали существенной. Данные даны в виде ± SEM.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Мы начали наше исследование при использовании той же самой non-GLP версии пептида NBD. (13,23,32–37). Этот пептид растворен в диметилсульфоксиде. Максимальная доза была 200 мкг на мышь, который по отношению к весу животных, которых мы использовали, составляла приблизительно 10 мг/кг. Мы обнаружили, что форма NBD, которая использовалась в наших исследованиях, растворенная в диметилсульфоксиде, показала значительную стабильность при оценке масс-спектрометрией. При сравнении с недавно изготовленным пептидом NBD оставался устойчивым после 1-дневного хранения при комнатной температуре и 2 недель при 37 ° C (рисунок 1A).

HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3105127/figure/f1-10_263_peterson/" \t "figure"

Рисунок 1

Чтобы определить, как эффективен NBD для восстановления функции тела, мы вводили этот пептид в течение 4 недель mdx мышам женского пола и мужского пола, и проводили тесты силы/выносливости в возрасте 8 недель. Режим осуществления однообразного механического труда привел после 4 дней у mdx мышей, получавших раствор без препарата(10%-ый диметилсульфоксид, 90%-ый физ. раствора), к 20 % - 25%-ому сокращению силы/выносливости мышц тела, в то время как животные получавшие NBD, показали 16 % (АНОВА, P <0.05) улучшение по этому показателю (рисунок 1B). Подобные результаты были получены, выполняя тест усталости после 5 дней однообразного механического труда (данные, не показаны), и различия между самцами и самками мыши не наблюдались ни в одной из групп. Поэтому, в последующих исследованиях, оба пола использовались для анализа.

Затем, определялась сократительная функция диафрагмы. Рассматриваемые мышци мышей получавших раствор (n = 16 от 10 мышей) и мышцы mdx (n = 37 от 22 мышей) мышей получавшим препарат были измерены в длину всегда с использованием идентичного протокола. Определенная сила, произведенная при 150 гц у мышей контроля, была в среднем 167 mN/mm2. Следую протоколу, используемому в наших исследованиях, при более низких частотах, мы уже получили максимальную тетаническую силу, среднее значение которой составило 181 mN/mm2 у мышей контроля. Эти уровни определенной силы почти идентичны с подобными исследованиями, выполненными при 37 ° C; 180 mN/mm2 Рукер и др. (29), 172 mN/mm2 Презант и др. (28), и 190 mN/mm2 Диас и др. (27). Мы установили, что при начальной частоте 20 гц, мышцы диафрагмы WT мышей произвели на 62 % (P <0.005) больше силы чем мышцы mdx мышей, получавших раствор без препарата. В тех же самых условиях улучшило функцию диафрагмы леченных mdx мышей на 43 %(25 мускулов от 14 мышей), среднее значение приближалось к группе WT мышей. Значительно, что это различие в силе было и при частоте 150 гц (рисунок 2А).

HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3105127/figure/f2-10_263_peterson/" \t "figure"

Рисунок2 Мы рассматривали, могла ли подобная эффективность у mdx мышей быть достигнута при использовании более низкой дозы NBD. Мы рассуждали, что получение подобного эффекта будет выгодно с точки зрения стоимости и безопасности. Поэтому, лечение было повторено с идентичным протоколом за исключением того, что использовалось в пять раз меньше пептида. Однако, поскольку результаты (см. рисунок 2A) лечения NBD в дозе 40 мкг/мышь показало незначительное улучшение функции диафрагмы (n = 22 мышц от 12 мышей) mdx мышей, получавших препарат, посравнению с mdx мышами, получавшими раствор или диким типом мышей. Эти результаты предполагают, что при текущем экспериментальном подходе, для улучшения функции mdx мышц при помощи NBD требует дозы выше 40 мкг/мышь.

В наших усилиях развить NBD как состав, подходящий для клиники, версия пептида синтезировалась при условиях GLP. Последовательность аминокислот включая область трансдукции белка была идентична родительскому составу non-GLP. Однако, новая версия была растворима в воде, которую мы считали выгодным для безопасности пациентов. К сожалению, по сравнению с первоначальным составом (NBD), GLP-NBD показал только статистически незначимое улучшение функции диафрагмы mdx мышей (n = 15 мышц от девяти мышей, рисунок 3). Эти данные принуждают нас прийти к заключению, что пептид GLP-NBD не обеспечивал существенную функциональную выгоду для дистрофин-дефицитных дыхательных мышц

HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3105127/figure/f3-10_263_peterson/" \t "figure"

Рисунок 3. Поскольку последовательности этих составов были идентичны, мы рассуждали, что объяснение несоответствия в наших результатах могло быть из-за метода, которым был очищен каждый пептид.

Производство NBD использовало TFA как противоион в стандартной обратной фазе, фаза очистки HPLC, в то время как GLP-NBD был произведен с дополнительным шагом очистки, используя ацетат в качестве противоиона.

Мы таким образом размышляли, что противоион, который оставался наряду с NBD во время лиофилизации, мог составлять различия в растворимости и таким образом потенциально объяснить различия в функциональном результате, который мы наблюдали. Чтобы проверить эту возможность, мы изменили противоион очистки в GLP-NBD с ацетата на TFA в попытке подражать первоначально произведенной версии NBD. Эту формулировку пептида назвали TFA-NBD. TFA-NBD был растворим в воде. Однако это преимущество в растворимости было незначительно по сравнению с потерей стабильности пептида, как обнаружено при масс-спектрометрии (данные, не показаны).

Чтобы проверить эффективность пептида TFA-NBD в пробирке, C2C12 миофибрилллы были обработанны пептидом и впоследствии стимулированы TNF в течение 30 минут, затем клетки были собраны и проанализированы на NF- B связывающую активность ДНК (EMSA). Результаты показали, что TFA-NBD, в двух отдельных дозах, был эффективен для блокады NF- B (рисунок 4A). Подобные результаты были получены, когда TFA-NBD был проверен на способность блокировать NF- B (рисунок 4B). Мы проверили способность TFA-NBD уменьшать NF- B активацию в мышцах mdx мышей. После 4 недель лечения (начинающийся в возрасте 4 недель) NF- B активность была уменьшена в мышцах диафрагмы, эти результаты рассматривают в сравнении с mdx мышами, получавшими раствор (рисунок 4C). Эта подтверждение результатов, что TFA-NBD действительно блокировал NF- B в естественных условиях. Что наиболее важно, когда TFA-NBD был проверен на эффективность у mdx мышей, 37 % (P <0.05), улучшение функции диафрагмы (n = 18 мускулов от 11 мышей) было достигнуто по сравнению с контролем (рисунок 4D). Сила мышц увеличилась на 63% по сравнению с мышами дикого типа, которое прослеживалось по всему диапазону частот. Эти результаты показывают, что мы смогли достигнуть функциональное улучшение диафрагмы при наиболее удачной форме пептида NBD, которая, как мы считаем, более благоприятна для клинического использования. HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3105127/figure/f4-10_263_peterson/" \t "figure"

Рисунок 4. В дополнение к улучшению функции мышц у mdx мышей наши предыдущие результаты продемонстрировали, что диметилсульфоксидная версия NBD была эффективна и в уменьшении повреждения и воспаления и в усилении регенерации mdx мышц конечности (2).

Чтобы оценить, могла ли подобная выгода быть достигнута с TFA-NBD, мы выполнили гистологические исследования скелетных мышц, изолированными у рассматриваемых mdx мышей. Результаты показали, что лечение TFA-NBD успешно уменьшало повреждение миофибриллв диафрагмы на 79 %, и в меньшей степени (64 %) в мышцах конечности, измерением IgG, которое отражает, что уровень повреждения мышц из-за некроза (рисунок 4E). Накопление макрофагов, используя F4/80 в качестве маркера, также уменьшилось в диафрагме, и мышцах конечности мышей (рисунок 4F) на 56 % и 72 % соответственно. Кроме того, экспрессия eMyHC (эмбриональный миозин тяжелая цепь) была значительно увеличена на 92 % в диафрагме, и на 478 % в мускулах конечности (изобразите 4 г), показывая, что лечение TFA-NBD производит регенеративный ответ, который характерен для блокады NF- B при травме мышцы. Вместе, эти данные демонстрируют, что TFA-NBD одинаково эффективен для того, чтобы облегчить воспаление и повреждение миофибрилл и способствовать регенерации мышц.

ОБСУЖДЕНИЕ

В этом исследовании мы выполнили анализ эффективности и возможности использования NBD как терапевтического средства для пациентов с МДД. Используя функционально эффективный, но клинически неподходящий пептид как шаблон, мы смогли успешно синтезировать пептид NBD, который отвечает преклиническим стандартам ( GLP) и поддерживает стабильность, при растворении в нетоксичном веществе (вода). Что наиболее важно, заключительная форма пептида сохранила способность улучшения функции и снижение гистологической дистрофической патологию у мышей. Эти благоприятные результаты поддержали наши усилия использовать NBD как лечение МДД.

Учитывая поставленную под угрозу функцию диафрагмы и функцию мышц конечности имеющаяся у пациентов с МДД, терапия, способная улучшать все скелетные мышцы, имеет первостепенную важность и для того, чтобы увеличить продолжительность жизни и для того, чтобы поддержать хорошее качество жизни. К сожалению, много стратегий лечения разрабатываются, чтобы справиться с дисфункцией мышц конечности, потенциально оставляя невылеченную диафрагму. Наша информационная поддержка терапии NBD для лечения дыхательных мышц и мышц конечности при МДД. Исходя из наших знаний никакая другая фармакологическая терапия не показала высокую степень улучшения функций диафрагмы, в отличии от того что мы смогли достигнуть у mdx мышей при лечении NBD.

NF- B является жизненной сигналом регулирующим функции, такие как выживание, апоптоз и пролиферацию для благосостояния целого тела, регулируя критические гены, вовлеченные в иммунные реакции (38). Следовательно, блокада всей передачи сигналов через NF- B, вероятно, привела бы к терапии, при которой отрицательные побочные эффекты перевешивают желаемую эффективность. Главное преимущество использования пептида NBD терапевтически состоит в том, что он не вмешивается в основную передачу сигналов NF- B,а только в альтернативный путь передачи сигналов через комплекс IKK (13,23). NBD, как показали блокировал передачу сигналов NF- B, не проявляя блокирующих эффектов на JNK или p38 MAPK (13). Профиль безопасности для NBD благоприятен. В естественных условиях, системная поставка NBD не связана с какой-либо описанной токсичностью у мышей или крыс. (33,34, 37,39–41) Кроме того, у модели мышей системной поставки NBD в течение только 5 дней было достаточно, чтобы поддержать клиническое улучшение в течение почти 3 недель (41), демонстрируя, что терапевтический эффект пептида NBD может пережить фармакокинетические свойства этого пептида.В этом исследовании мы демонстрируем возможности пептида NBD как терапевтического средства для облегчения патофизиологии МДД. Развитие GLP, растворимого в воде пептида, который снижает функциональный дефицит мышц, воспаление и некроз, способствуя регенерации мышц у mdx мышей, представляет преклинические свидетельства для эффективности и безопасности пептида NBD.

Ссылки

1. Blake DJ, Weir A, Newey SE, Davies KE. Function and genetics of dystrophin and dystrophin-related proteins in muscle. Physiol Rev. 2002;82:291–329. [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11917091" \t "pmc_ext" PubMed]

2. Acharyya S, et al. Interplay of IKK/NF-kappaB signaling in macrophages and myofibers promotes muscle degeneration in Duchenne muscular dystrophy. J Clin Invest. 2007;117:889–901. [PMC free article] [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17380205" \t "pmc_ext" PubMed]

3. Monici MC, Aguennouz M, Mazzeo A, Messina C, Vita G. Activation of nuclear factor-kappaB in inflammatory myopathies and Duchenne muscular dystrophy. Neurology. 2003;60:993–7. [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12654966" \t "pmc_ext" PubMed]

4. Chen YW, et al. Early onset of inflammation and later involvement of TGFbeta in Duchenne muscular dystrophy. Neurology. 2005;65:826–34. [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16093456" \t "pmc_ext" PubMed]

5. Messina S, et al. Lipid peroxidation inhibition blunts nuclear factor-kappaB activation, reduces skeletal muscle degeneration, and enhances muscle function in mdx mice. Am J Pathol. 2006;168:918–26. [PMC free article] [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16507907" \t "pmc_ext" PubMed]

6. Messina S, et al. Nuclear factor kappa-B blockade reduces skeletal muscle degeneration and enhances muscle function in Mdx mice. Exp Neurol. 2006;198:234–41. [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16410003" \t "pmc_ext" PubMed]

7. Mendell JR, et al. Randomized, double-blind six-month trial of prednisone in Duchenne’s muscular dystrophy. N Engl J Med. 1989;320:1592–7. [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/2657428" \t "pmc_ext" PubMed]

8. De Bosscher K, et al. Glucocorticoid-mediated repression of nuclear factor-kappaB-dependent transcription involves direct interference with transactivation. Proc Natl Acad Sci U S A. 1997;94:13504–9. [PMC free article] [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/9391055" \t "pmc_ext" PubMed]

9. De Bosscher K, et al. Glucocorticoids repress NF-kappaB-driven genes by disturbing the interaction of p65 with the basal transcription machinery, irrespective of coactivator levels in the cell. Proc Natl Acad Sci U S A. 2000;97:3919–24. [PMC free article] [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10760263" \t "pmc_ext" PubMed]

10. Karin M, Ben-Neriah Y. Phosphorylation meets ubiquitination: the control of NF-[kappa]B activity. Annu Rev Immunol. 2000;18:621–63. [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10837071" \t "pmc_ext" PubMed]

11. Perkins ND. Integrating cell-signalling pathways with NF-kappaB and IKK function. Nat Rev Mol Cell Biol. 2007;8:49–62. [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17183360" \t "pmc_ext" PubMed]

12. Hayden MS, Ghosh S. Shared principles in NF-kappaB signaling. Cell. 2008;132:344–62. [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18267068" \t "pmc_ext" PubMed]

13. Baima ET, et al. Novel insights into the cellular mechanisms of the anti-inflammatory effects of NF-kappaB essential modulator binding domain peptides. J Biol Chem. 2010;285:13498–506. [PMC free article] [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20167598" \t "pmc_ext" PubMed]

14. Akers WS, Cross A, Speth R, Dwoskin LP, Cassis LA. Reninangiotensin system and sympathetic nervous system in cardiac pressure-overload hypertrophy. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2000;279:H2797–806. [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11087234" \t "pmc_ext" PubMed]

15. Archer JD, Vargas CC, Anderson JE. Persistent and improved functional gain in mdx dystrophic mice after treatment with L-arginine and deflazacort. Faseb J. 2006;20:738–40. [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16464957" \t "pmc_ext" PubMed]

16. Barton ER, Morris L, Kawana M, Bish LT, Toursel T. Systemic administration of L-arginine benefits mdx skeletal muscle function. Muscle Nerve. 2005;32:751–60. [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16116642" \t "pmc_ext" PubMed]

17. Carlson CG, Samadi A, Siegel A. Chronic treatment with agents that stabilize cytosolic IkappaB-alpha enhances survival and improves resting membrane potential in MDX muscle fibers subjected to chronic passive stretch. Neurobiol Dis. 2005;20:719–30. [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15955706" \t "pmc_ext" PubMed]

18. Hnia K, et al. L-arginine decreases inflammation and modulates the nuclear factor-kappaB/matrix metalloproteinase cascade in mdx muscle fibers. Am J Pathol. 2008;172:1509–19. [PMC free article] [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18458097" \t "pmc_ext" PubMed]

19. Pan Y, et al. Curcumin alleviates dystrophic muscle pathology in mdx mice. Mol Cells. 2008;25:531–7. [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18460899" \t "pmc_ext" PubMed]

20. Siegel AL, et al. Treatment with inhibitors of the NF-kappaB pathway improves whole body tension development in the mdx mouse. Neuromuscul Disord. 2009;19:131–9. [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19054675" \t "pmc_ext" PubMed]

21. Voisin V, et al. L-arginine improves dys-trophic phenotype in mdx mice. Neurobiol Dis. 2005;20:123–30. [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16137573" \t "pmc_ext" PubMed]

22. Stedman HH, et al. The mdx mouse diaphragm reproduces the degenerative changes of Duchenne muscular dystrophy. Nature. 1991;352:536–9. [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/1865908" \t "pmc_ext" PubMed]

23. May MJ, et al. Selective inhibition of NF-kappaB activation by a peptide that blocks the interaction of NEMO with the IkappaB kinase complex. Science. 2000;289:1550–4. [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10968790" \t "pmc_ext" PubMed]

24. Mulieri LA, Hasenfuss G, Ittleman F, Blanchard EM, Alpert NR. Protection of human left ventricular myocardium from cutting injury with 2,3-butanedione monoxime. Circ Res. 1989;65:1441–9. [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/2805252" \t "pmc_ext" PubMed]

25. Chandrasekharan K, et al. A human-specific deletion in mouse Cmah increases disease severity in the mdx model of Duchenne muscular dystrophy. Sci. Transl. Med. 2010;2:42ra54.

26. Janssen PML, Hiranandani N, Mays TA, Rafael-Fortney JA. Utrophin deficiency worsens cardiac contractile dysfunction present in dystrophin-deficient mdx mice. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2005;289:H2373–8. [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16024571" \t "pmc_ext" PubMed]

27. Diaz PT, Brownstein E, Clanton TL. Effects of N-acetylcysteine on in vitro diaphragm function are temperature dependent. J Appl Physiol. 1994;77:2434–9. [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/7868466" \t "pmc_ext" PubMed]

28. Prezant DJ, et al. Temperature dependence of rat diaphragm muscle contractility and fatigue. J Appl Physiol. 1990;69:1740–5. [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/2272967" \t "pmc_ext" PubMed]

29. Rucker M, et al. Rescue of enzyme deficiency in embryonic diaphragm in a mouse model of metabolic myopathy: Pompe disease. Development. 2004;131:3007–19. [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15169761" \t "pmc_ext" PubMed]

30. Acharyya S, et al. Dystrophin glycoprotein complex dysfunction: a regulatory link between muscular dystrophy and cancer cachexia. Cancer Cell. 2005;8:421–32. [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16286249" \t "pmc_ext" PubMed]

31. Guttridge DC, Albanese C, Reuther JY, Pestell RG, Baldwin AS., Jr NF-kappaB controls cell growth and differentiation through transcriptional regulation of cyclin D1. Mol Cell Biol. 1999;19:5785–99. [PMC free article] [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10409765" \t "pmc_ext" PubMed]

32. Chapoval SP, et al. Inhibition of NF-kappaB activation reduces the tissue effects of transgenic IL-13. J Immunol. 2007;179:7030–41. [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17982094" \t "pmc_ext" PubMed]

33. Dasgupta S, et al. Antineuroinflammatory effect of NF-kappaB essential modifier-binding domain peptides in the adoptive transfer model of experimental allergic encephalomyelitis. J Immunol. 2004;173:1344–54. [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15240729" \t "pmc_ext" PubMed]

34. di Meglio P, Ianaro A, Ghosh S. Amelioration of acute inflammation by systemic administration of a cell-permeable peptide inhibitor of NF-kappaB activation. Arthritis Rheum. 2005;52:951–8. [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15751079" \t "pmc_ext" PubMed]

35. Ghosh A, et al. Selective inhibition of NF-kappaB activation prevents dopaminergic neuronal loss in a mouse model of Parkinson’s disease. Proc Natl Acad Sci U S A. 2007;104:18754–9. [PMC free article] [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18000063" \t "pmc_ext" PubMed]

36. Shibata W, et al. Cutting edge: The IkappaB kinase (IKK) inhibitor, NEMO-binding domain peptide, blocks inflammatory injury in murine colitis. J Immunol. 2007;179:2681–5. [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17709478" \t "pmc_ext" PubMed]

37. Tas SW, et al. Local treatment with the selective IkappaB kinase beta inhibitor NEMO-binding domain peptide ameliorates synovial inflammation. Arthritis Res. Ther. 2006;8:R86. [PMC free article] [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16684367" \t "pmc_ext" PubMed]

38. Hayden MS, Ghosh S. Signaling to NF-kappaB. Genes Dev. 2004;18:2195–224. [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15371334" \t "pmc_ext" PubMed]

39. Clohisy JC, Yamanaka Y, Faccio R, Abu-Amer Y. Inhibition of IKK activation, through sequestering NEMO, blocks PMMA-induced osteo-clastogenesis and calvarial inflammatory osteolysis. J Orthop Res. 2006;24:1358–65. [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16705717" \t "pmc_ext" PubMed]

40. Dai S, Hirayama T, Abbas S, Abu-Amer Y. The IkappaB kinase (IKK) inhibitor, NEMO- binding domain peptide, blocks osteoclastogenesis and bone erosion in inflammatory arthritis. J Biol Chem. 2004;279:37219–22. [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15252035" \t "pmc_ext" PubMed]

41. Jimi E, et al. Selective inhibition of NF-kappa B blocks osteoclastogenesis and prevents inflammatory bone destruction in vivo. Nat Med. 2004;10:617–24. [ HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15156202" \t "pmc_ext" PubMed]

Переведено проектом МОЙМИО http://www/mymio/orgОригинальная статья http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3105127/?tool=pubmed




Похожие работы:

«334010-161290Полномочия бракеражной комиссии 0Полномочия бракеражной комиссии Контролировать организацию работы пищеблока Периодически присутствовать при закладке основных продуктов Ежедневно проверять вых...»

«ТЕЛЕФОНЫРАБОТНИКОВ РЕВИЗОРСКОГО АППАРАТА И ДОРПРОФЖЕЛ ЗАНИМАЮЩИХСЯ ВОПРОСАМИ РАБОТЫ С ОБЩЕСТВЕННЫМИ ИНСПЕКТОРАМИ ПО БЕЗОПАСНОСТИ ДВИЖЕНИЯ ПОЕЗДОВ №№ п.п. должность Ф.И.О. телефоны Примеч. Вербич Владимир Василь...»

«Мелисса де ла Круз Обманутый ангел Голубая кровь — 5 OCR: Margosha1011; Spellcheck: LOVE-L Мелисса де ла Круз "Обманутый ангел": Эксмо, Домино; Москва, Санкт-Петербург, 2011 Оригинальное название: Melissa de la Cruz "Misguided angel", 2010 ISBN: 978-5-699-52242-2 Перевод: О. Степашкина Анно...»

«АДМИНИСТРАЦИЯ БАРЛАКСКОГО СЕЛЬСОВЕТАМОШКОВСКОГО РАЙОНА НОВОСИБИРСКОЙ ОБЛАСТИПОСТАНОВЛЕНИЕ от 24.04.2013 № 277 Об определении способа расчета расстояния от организаций и (или) объектов, указанных в постановлении...»

«Нилеце урокось(Урок четвертый) "Тюст" (Цвета). "Эмежть" (Овощи) На этом уроке мы узнаем обозначения цвета и оттенков по-эрзянски, закрепим их с помощью игр, познакомимся с названиями овощей.1.Кортамонь налксемаТеемс кортамо кудораськень ломантнеде ды кудонь-кардазонь ракшатнеде. (Провес...»

«ФББ МГУ, МоскваОписание программы PDBParserВерсия программы 1.3.1 Автор Котлов Никита31.12.2014 [Введите аннотацию документа. Аннотация обычно представляет собой краткий обзор содержимого документа. Введите аннотацию документа. Аннотация обычно представляет собой краткий обзор содержимого документа.] Оглавление TOC...»

«МИНОБРНАУКИ РОССИИ Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Новосибирский национальный исследовательский государственный университет" (Новосибирский государственный университет, НГУ)П Р И...»

«АДМИНИСТРАЦИЯ ГОРОДА ТЮМЕНИРАСПОРЯЖЕНИЕ от 2 декабря 2013 г. N 730-ркОБ УТВЕРЖДЕНИИ ПРОГНОЗНОГО ПЛАНА ПРИВАТИЗАЦИИМУНИЦИПАЛЬНОГО ИМУЩЕСТВА ГОРОДА ТЮМЕНИ НА 2014 ГОД (в ред. распоряжений Администрации города Тюмениот 10.02.2014 N 73-рк, от 28.05.2014 N 316-рк, от 10.07.2014 N 390-рк) В соответствии с...»

«Перечень заявлений на присвоение (подтверждение) статуса ТК оборудования российского происхождения для рассмотрения на очередном заседании МЭС № п/п Наименование ТК оборудования Организация заявитель Подтверждение статуса 1. Малоканальн...»

«Пояснительная запискаРабочая программа по географии для 6-9 класса разработана на основе следующих документов: Примерная программа по географии для основной школы составлена на основе Фундаментального ядра содержания общего образования и требований к результатам основного общего образования, предста...»







 
2017 www.docx.lib-i.ru - «Бесплатная электронная библиотека - интернет материалы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.